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抗体应用简介

  • ​​酶联免疫吸附实验(ELISA)

    ELISA的实验原理是基于抗体/抗原的特异性结合,它不仅能够对特定的蛋白进行定量分析,还可以研究分子之间的相互作用或其他特性。
    将针对靶标的抗体与检测酶偶联。在加入底物时,这种酶催化底物生成有色产物。通过分光光度计的测定,便可以知道样品中抗原的浓度。

  • ​​蛋白质印迹(WB)

    WB通常被用来确定样品间蛋白的相对表达水平,还可以确定目标蛋白的分子量大小,这有利于我们对蛋白的翻译后修饰过程进行研究。
    根据分子量大小的不同,组织或细胞裂解液中的蛋白通过凝胶电泳得以分离。接着,分离的蛋白被转移到膜上,随后用抗体来检测感兴趣的蛋白。

  • ​​免疫组织化学(IHC)

    IHC揭示了样本内抗原的组织特异性和亚细胞定位。相比与WB和ELISA,它的定量分析应用较少,但是在完整组织中对于蛋白表达的分析更有优势 。
    IHC染色是通过抗体识别靶蛋白实现的。抗原抗体复合物能够通过酶促反应或者荧光来实现可视化。这些底物可以直接偶联到一抗或二抗上。

  • ​​免疫细胞化学(ICC)

    ICC通常使用荧光标记的抗体来研究蛋白的亚细胞分布。与IHC相比,该技术提供了更高的空间分辨率,因为培养的细胞不会有组织样本的复杂环境。
    在已经固定并通透处理的细胞培养样本中,抗体和靶蛋白特异性结合,再通过与一抗直接偶联的荧光素或荧光二抗,使其可视化。用荧光显微镜即可对结果信号进行观察。多个靶标可以使用不同荧光标记的一抗同时进行研究。

  • ​​流式细胞术和细胞分选(FACS)

    流式细胞术是测量细胞某些化学和物理特性的一种手段。参数测量包括细胞大小和细胞表面以及细胞内标记物的表达量。
    流式细胞仪测量被标记抗体的荧光。细胞分选(FACS)是一种更复杂的系统,它能量化荧光信号,并将细胞以预先选定的特征(如荧光强度、大小和生存能力),从混合细胞群中分离出来。

  • ​​免疫沉淀 (IP)

    免疫沉淀是分离纯化单一或复合蛋白的最常用的一种方式。抗体被固定在固相基质(如磁珠/琼脂糖小球)上,从而从复杂溶液中捕获抗原。
    染色质免疫沉淀(ChIP) 技术用来确定特定蛋白是否与体内特定DNA序列相互作用。

  • ​​酶联免疫斑点 (ELISPOT)

    ELISPOT用于检测如细胞因子和生长因子这样的分泌蛋白。该技术可以量化和对比各种刺激下的免疫反应。
    在96孔板中,细胞生长在带有抗体包被的PVDF膜或硝化纤维素膜上,分泌蛋白会与抗体结合。抗体-抗原间的相互作用可以通过二抗进行检测,使得分泌蛋白的亲本细胞呈现特定的颜色(一个点=1个细胞)。对膜进行扫描和分析,以定量分泌蛋白的细胞的数量/百分比。

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